Отеки ног у лошадей

14.01.97 г__ № __13-4-2/819____
ИНСТРУКЦИЯ
О мероприятиях по борьбе
со случной болезнью одно-
копытных

Случная болезнь (дурина) инвазионная болезнь лошадей, ослов, мулов, вызывае-мая Trypanosoma equiperdum протекает преимущественно хронически.
Заражение животных происходит, в основном, половым путем, при искусствен-ном осеменении спермой, содержащей возбудителя, а также механическим - через предметы ухода, руки, различные инструменты (влагалищное зеркало, мочевой катетер, искусственная вагина.).
Заболевание животных случной болезнью наблюдают в любое время года. Бо-лезнь характеризуется длительным (3-4 нед) инкубационным периодом, появле-нием отеков половых органов, вымени, живота (отечный брус), язв, депигмента-цией кожи, бляшек, парезов, параличей губ, ушей и расстройством координации движения. При патологоанатомическом исследовании отмечают истощение, де-генеративные изменения в мышцах сердца, крупа и задних конечностей.
1.4 Диагноз на случную болезнь однокопытных устанавливают на основании эпи-зоотологических, клинических, патологоанатомических данных и результатов ла-бораторных исследований (микроскопического, серологического).
1.5 В лабораторию для исследования на случную болезнь направляют соскобы с примесью крови из различных мест слизистой оболочки влагалища, мочеиспуска-тельного канала, сперму, экссудат из надрезов отеков и бляшек.
Соскобы из различных мест слизистой оболочки уретры берут с помощью урет-ральной ложки. Для этого жеребца фиксируют и вводят внутримышечно в область крупа рометар в дозе 7,5 см3 на 100 кг массы тела. Через 7-10 мин вводят урет-ральную ложку на глубину 5-6 см и делают 3-4 возвратно-поступательных движе-ния по стенке уретры. После чего уретральную ложку осторожно извлекают, опускают материал в пробирку с 2 см3 физиологического раствора рН 7,0-7,2 и закрывают пробкой.
Сперму от жеребцов получают на искусственную вагину в хозяйстве, переливают в стерильные пробирки (флаконы) по 2см3 и закрывают пробками.
Соскобы со стенок влагалища берут уретральной ложкой через влагалищное зер-кало. Материал опускают в пробирку с 2 см3 физиологического раствора рН 7,0-7,2 и закрывают пробкой.
Экссудат из надрезов отеков и бляшек собирают шприцем, переносят в пробирку и закрывают пробкой.
1.6 Для серологического исследования направляют 1-2 см3 сыворотки крови, на-тивной или консервированной 5 %-ным раствором фенола (1 капля на 1см3 сыво-ротки) или сухой борной кислотой (2-4% к объему).
1.7 Отобранный патологический материал в пробирках, доставляют в лаборато-рию в термосе со льдом не позднее 4-х часов, сыворотку крови - не позднее 2 дней с момента взятия.
1.8 Исследования биологического материала проводят согласно действующим ме-тодическим указаниям по лабораторным исследованиям на трипаносомозы лоша-дей, верблюдов, ослов, мулов и собак.

1.9 Результаты обследования лошадей.

1.9.1 Больными считают животных при наличии одного из следующих показате-лей:
обнаружение трипаносом в мазках из исходного материала,
обнаружение характерных для случной болезни клинических признаков (бляшки, парезы, параличи губ, ушей, зада, характерная депигментация, отеки половых губ и др) при отрицательных результатах микроскопического и серологического ис-следований; получение положительного серологического исследования; получе-ние дважды сомнительного серологического исследования.
1.9.2 Подозрительными по заболеванию считаются лошади:
имеющие неясные клинические признаки при отрицательных результатах сероло-гических исследований,
бывшие в случке с больными;
давшие в РСК один раз сомнительный результат при трехкратном исследовании. Повторно на случную болезнь лошадей исследуют серологическим методом через 30 дн.

2. Мероприятия по предупреждению заболевания лошадей случной болезнью

2.1 В целях профилактики случной болезни необходимо:
- комплектовать коневодческие хозяйства (фермы) лошадьми из благополучных хозяйств-поставщиков;
- не допускать к случке племенных жеребцов с кобылами (конематками), не про-веренными на случную болезнь в РСК;
- перед случкой клинически и серологически обследовать на случную болезнь племенных и пользовательных взрослых однокопытных животных дважды с ин-тервалом 30 дней;
2.2 Животных, вновь поступивших из других хозяйств, содержат изолированно не менее 30 дней, подвергают тщательному клиническому осмотру, микроскопи-ческому и серологическому исследованиям.
2.3 В случае выявления среди завезенных животных больных, положительно и сомнительно реагирующих в РСК, всю партию лошадей убивают.
2.4 На случных пунктах обслуживающий персонал при искусственном осемене-нии животных должен использовать одноразовые полиэтиленовые перчатки и пи-петки. Инструменты, применяемые для отбора материала, дезинфицируют путем кипячения в течение 10-15 мин. Подставных кобыл (на которых получают спер-му) в обязательном порядке обследуют на случную болезнь клинически и сероло-гически.
2.5 Для получения спермы за каждым жеребцом закрепляют отдельную искусст-венную вагину.
2.6 Ректальное исследование кобыл проводят в перчатках разового применения.

3. Мероприятия, проводимые в неблагополучном хозяйстве.

3.1 При установлении диагноза хозяйство (ферму) объявляют неблагополучным по случной болезни и в нем решением администраций района вводят ограниче-ния. При этом запрещают ввод в хозяйство и вывод из него лошадей, ослов, мулов для племенных и пользовательных целей, а также перегруппировку их внутри хо-зяйства.
3.2 Взрослое поголовье лошадей, ослов и их гибридов неблагополучного хозяйст-ва подвергают клиническому, микроскопическому и серологическому исследова-ниям. Больных, положительно и дважды сомнительно реагирующих в РСК, жи-вотных убивают, а подозрительных по заболеванию случной болезнью содержат изолированно и вновь обследуют микроскопическим и серологическим методами с интервалом 30 дн до получения трехкратного отрицательного результата по группе.
3.3 В неблагополучных хозяйствах ведут точный учет жеребцов (ослов, мулов), кобыл, идущих в случку.
3.4.Мясо больных и положительно реагировавших животных перерабатывают в вареные колбасы согласно п. 5.1 действующих Правил ветеринарного осмотра убойных животных и ветеринарно-санитарной экспертизы мяса и мясных продук-тов.
При истощении животного или обнаружении дистрофических изменений в мы-шечной ткани, мясо и внутренние органы направляют на утилизацию.
Шкуры от павших и вынужденно убитых больных животных выпускают без ог-раничений.
3.5.После каждого случая выделения зараженного животного и убоя его, а также перед снятием ограничений помещения, предметы ухода, оборудование считают от навоза, моют и подвергают дезинфекции одним из следующих препаратов: 2 %-ный раствор натра едкого, 2 %-ный раствор формалина, параформальдегида, 2 %-ный раствор хлорной извести, 5 %-ный раствор лизола из расчета 0,3-0.5 л/м2 площади. Раствор натра едкого применяют горячим (30-90°С).
3.6.Ограничения с неблагополучного хозяйства по случной болезни лошадей сни-мают через 2 года после последнего случая выделения клинически больного жи-вотного и получения ежегодно в течение этого периода отрицательных результа-тов серологических исследований.
3.7.После оздоровления хозяйства от случной болезни жеребцов-производителей и кобыл случного возраста ежегодно в течение 5 лет подвергают трехкратному серологическому исследованию за 3, 2 и 1 месяц до начала случной компании. Животных, давших положительную или дважды сомнительную реакции, убивают и поступаю согласно п. 3 настоящей инструкции.

С утверждением настоящей инструкции на территории Российской Федерации утрачивает силу « инструкция о мероприятиях по предупреждению и ликвидации случной болезни однокопытных», утвержденная Главным управлением ветерина-рии Госкомиссии Совмина СССР по продовольствию и закупкам 12 ноября 1990 года.
УТВЕРЖДАЮ
Заместитель начальника Департамента ветеринарии
В.В. Селиверстов

Методические указания по лабораторным исследованиям на случную болезнь лошадей, ослов, мулов
(Утверждены. 16 октября 1984 г.)
1. Общие положения.

1.1. Случная болезнь—протозойное заболевание лошадей, ослов, мулов, вызываемое возбудителем Trypanosoma equiperdum; про-текает преимущественно хронически.
1.2. Диагноз на случную болезнь ставят на основании результатов микроскопического и серологического исследований материалов с учетом клинических и эпизоотологических данных.
1.3. Для исследования в лабораторию направляют: соскобы со слизистой оболочки влагалища, мочеиспускательного канала, взятые уретральной ложкой; выпот из надрезов отеков и бляшек, собранный шприцем в стерильные пробирки; сыворотку крови нативную или консервированную одним из общепринятых методов.
Патологический материал доставляют в термосе со льдом и иследуют не позднее 6 ч, а сыворотку крови — не позднее 2 дней пос-ле взятия.
2. Микроскопическое исследование.
2.1. Из доставленного материала делают раздавленные капли и 6—8 тонких мазков.
2.1.1. Соскоб или выпот густой консистенции разбавляют теплым физиологическим раствором (37 °С) 1:2, наносят каплю на предметное стекло, накрывают покровным и исследуют на наличие подвижных трипаносом в затемненном поле микроскопа при малом увеличении.
2.1.2. Тонкие мазки высушивают на воздухе, фиксируют метиловым спиртом в течение 3—5 мин или этиловым 20—25 мин, окрашивают по Романовскому в течение 20—30 мин, затем промывают водой, высушивают и исследуют с использованием иммерсионной системы микроскопа.
Протоплазма трипаносом окрашивается в голубой цвет, ядро - в розовый, жгутик и ундулирующая мембрана — в светло-розовый.
3. Серологическое исследование.
3.1. Серологическое исследование сыворотки крови проводят в реакции связывания комплемента (РСК).
3.2. Компоненты реакции:
антиген трипаносомный жидкий или лиофилизированный;
комплемент — нативная, консервированная или сухая (изготовленная на биофабрике) сыворотка крови морской свинки;
гемолитическая сыворотка (гемолнзин) с титром не ниже 1:1000;
нормальная и испытуемые сыворотки нативные или консервированные одним из общепринятых методов;
2,5 %-ная взвесь эритроцитов барана на физиологическом рас-творе;
физиологический раствор—0,85 %-ный раствор химически чистого хлорида натрия на дистиллированной воде с рН 6,8—7,2.
3.3. Подготовка компонентов для реакции.
3.3.1. Перед постановкой реакции готовят разведение каждого компонента в соответствии с указаниями на этикетках и в количе-стве, необходимом для всего опыта, включая титрование. В процессе работы не допускается дополнительно разводить компоненты, смешивать их с ранее разведенными и использовать в реакции без титрования.
3.3.2. При использовании сухого комплемента содержимое необходимого количества ампул растворяют в физиологическом растворе и сливают в одну пробирку. Полученный раствор комплемента используют для титрования (в разведении 1:20) и главного опыта.
3.3.3. Гемолизин используют в реакции в удвоенном титре. Например, при титре гемолизина 1:1000 его берут 2:1000.
3.3.4. Испытуемые трипаносомную и нормальную сыворотки, разведенные для главного опыта и титрования комплемента, инактивируют 30 мин при 56—58 С (сыворотки ослов и мулов — при 64 С).
3.3.5. Антиген трипаносомный лиофилизированный или жидкий используют в рабочем разведении, которое в 2 раза ниже его предельного титра. Например, титр антигена 1:200, его рабочее разведение будет 1:100.
3.3.6. Эритроциты барана отмывают физиологическим раствором путем центрифугирования при 1,5—3 тыс. об/мин в течение 10—15 мин до полной прозрачности надосадочной жидкости, после чего готовят 2,5 %-ную взвесь на физиологическом растворе.
3.3.7. Физиологический раствор, используемый для разведения компонентов, готовят в день постановки реакции и кипятят в течение 5 мин.
3.4. Разведенные компоненты перед постановкой реакции проверяют на антикомплементарность и гемотоксичность
3.5. После проверки компонентов готовят гемолитическую систе-му, смешивая равные объемы гемолизина в рабочем титре с 2,5 %-ной взвесью эритроцитов и выдерживают ее 25—30 мин при 37— 38 С
3.6. Титрование компонентов реакции.
3.6.1. Гемолизин титруют при использовании новой серии или в случае подозрения на снижение титра.
Из основного разведения гемолизина 1:100 (0,1 мл гемолизина и 9,9 мл физиологического раствора) готовят следующие разведения 1:500; 1:1000; 1:1500; 1:2000; 1:2500; 1:3000.
Затем в ряд пробирок переносят по 0,5 мл каждого разведения гемолизина, добавляют в каждую пробирку 0,5 мл комплемента в разведении 1:20, 0,5 мл 2,5 %-ной взвеси эритроцитов, 1,0 мл физиологического раствора и выдерживают в водяной бане 10 мин при 37-38 С.
Титром гемолизина считают наибольшее его разведение, при ко-тором получен полный гемолиз эритроцитов.
3.6.2. Комплемент титруют в гемолитической системе из разве-дения 1:20 в дозах от 0,1 до 0,37 с интервалом 0,03 мл. В каждую пробирку добавляют недостающее до 0,5 мл количество физиологического раствора, по 1,0 мл гемолитической системы и физиологического раствора (вместо антигена и сыворотки) и выдерживают в во-дяной бане 10 мин при 37—38 °С.
Титром комплемента в гемолитической системе считают наименьшее его количество, вызывающее полный гемолиз эритроцитов. При использовании биофабричного комплемента титрование его в гемолитической системе необязательно.
3.6.3. Титрование комплемента в бактериолитической системе проводят перед каждой постановкой реакции на 3—4 сыворотках: позитивной (трипаносомной), негативной и 1—2 сыворотках из опыта.
Каждую сыворотку разливают по 0,1 мл в два ряда пробирок, добавляют по 0,4 мл физиологического раствора и инактивнруют, как указано в п. 3.3.4, или сначала готовят разведение сывороток 1:5, инактивируют и разливают по 0,5 мл. Затем в пробирки обоих рядов вносят комплемент, разведенный 1:20 в дозах от 0,13 до 0,37 с интервалом 0,03 мл.
Для более точной дозировки рекомендуют приготовить в дополнительном ряду пробирок необходимые разведения комплемента в 10-кратных объемах, затем аппаратом Флоренского с пипетками объемом 0,5 мл перенести разведение комплемента в ряды с сыворотками для титрования.
Внесение остальных компонентов и режим титрования указаны в таблице 3 на примере негативной сыворотки.
Титром комплемента в бактериолитической системе считают минимальное количество его, вызывающее полный гемолиз эритроцитов в пробирках с негативной и испытуемой сывороткой без антигена, при полной задержке гемолиза в пробирках с трипаносомной сывороткой и антигеном (в таблице 1 титр равен 0,25).
Для главного опыта берут дозу комплимента, полученную при титровании.
3.7. Общее количество комплемента для главного опыта определяют по формуле
Х=ТП/20
где X— количество комплемента для главного опыта; Т-титр комплимента в бактериолитической системе; П-количество пробирок в реакции; 20-разведение комплимента при тировании;
Например, в опыте 100 пробирок, титр комплименте 0,25, расчет его на опыт 025х100/20=1,25
Необходимое количество разведенного комплемента для реакции равно 50 мл (0,5х100), следовательно, к 1,25 мл основного раствора комплимента добавляют 48,75 мл физиологического раствора.
3.8. Постановка главного опыта.
3.8.1. Испытуемые сыворотки исследуют в разведении 1:5 и 1:10 с антигеном и 1:5 без антигена (контроль). При массовых исследованиях допускается постановка реакции в одном разведении 1:5 (без контроля) с последующей перестановкой всех реагирующих сывороток, как указано выше.
Для этого каждую сыворотку разливают по 0,1 и 0,05 мл (опытные пробирки) и 0,1 мл (контрольные), добавляют соответственно 0,4, 0,45 и 0,4 мл физиологического раствора и инактивируют, как указано в п. 3.3.4.
В опытные пробирки вносят по 0,5 мл трипаносомного антигена в рабочем разведении, в контрольные — по 0,5 мл физиологического раствора, во все пробирки—по 0,5 мл комплемента в установленном титре.
После выдерживания реакции в водяной бане (20 мин при 37—38С) во все пробирки вносят по 1 мл гемолитической системы и вновь помещают в баню на 15 мин при 37—38С.
3 8.2. Контроли главного опыта:
позитивная и негативная сыворотки в разведении 1:5 с антигеном и без антигена;
антиген в двойной дозе без сыворотки (на антикомплементарность);
антиген в двойной дозе без сыворотки и комплемента (на гемотоксичность).
3.9. Учет и оценка результатов реакции.
3.9.1. Учет результатов реакции проводят дважды: сразу после водяной бани и на следующий день при хранении реакции в холодильнике.
Сначала учитывают результаты контролей: в пробирках с позитивной сывороткой и антигеном, с двойной дозой антигена без сыворотки и комплемента должна быть полная задержка гемолиза; в пробирках с позитивной и негативной сыворотками без антигена, с негативной сывороткой и антигеном, с двойной дозой антигена без сыворотки — полный гемолиз.
Степень задержки гемолиза эритроцитов определяют по шкале, приготовленной перед учетом реакции. Для этого содержимое 4—5 пробирок с полным гемолизом сливают в одну и готовят разведения по таблице
Разведения гемолизированной жидкости
Гемолизированная жидкость 1,0 0,75 0,5 0,25 -
Физиологический раствор --- 2,5 0,5 0,75 1
Процент гемолиза 100 75 50 25 0

Степень гемолиза в пробирках с исследуемыми сыворотками определяют в сравнении с гемолизом в пробирках шкалы.
Процент гемолиза выражают в крестах:
(++++) – отсутствие гемолиза, надосадочная жидкость бесцветная;
(+++) – гемолиз 25% эритроцитов;
(++) – гемолиз 50% эритроцитов;
(+) – гемолиз 75% эритроцитов;
(-) – полный гемолиз эритроцитов, осадок отсутствует.
3.9.2 Диагностическая оценка реакции. Положительной считают реакцию, оцененную на 2—4 креста в разведении 1:5 или 1—4 креста в разведении 1:10, сомнительной—на 1 крест в разведении 1:5, отрицательной — при полном гемолизе эритроцитов в обоих разведениях сыворотки.
3.10. Животных, с сывороткой крови которых получена сомни-тельная РСК, исследуют повторно через месяц.
4. Диагноз считают установленным при получении одного из следующих показателей:
обнаружение возбудителя при микроскопическом исследовании патматериала;
получение положительного результата РСК.
5. Сроки исследований. микроскопического — 1 день, серологиче-ского — 4 дня.